18 Mart 2024

Kanatlı kırmızı akarı (PRM) olarak da bilinen Dermanyssus gallinae, dünya çapında yumurta tavuğu işletmelerinde bulunan ektoparazitik bir akardır ve kanatlı endüstrisinde önemli bir zararlıdır¹.

Akar, tavukların kanıyla sadece 30 ila 60 dakika içinde beslenir².

PRM gündüzleri normalde kümes içindeki çatlak ve yarıklarda saklanır ve geceleri kümes hayvanlarıyla beslenmek için dışarı çıkar. Akar, tavukların kanıyla sadece 30 ila 60 dakika içinde beslenir². Akar, anemiye neden olarak tavuk sağlığı ve refahı üzerinde ciddi strese yol açar. Erişkin bir dişi PRM yaklaşık 1 mm uzunluğunda ve 0,4 mm genişliğindedir ve ergin renkleri dolgunluğa bağlı olarak griden kırmızıya kadar değişir. Akarın yumurta, larva, protonimf, deutonimf ve ergin olmak üzere 5 yaşam evresi vardır³. Yaşam döngüsü, uygun koşullar altında hızlı popülasyon büyümesi ile 7 gün içinde tamamlanabilir. Protonimften deutonimfe ve oradan da ergine geçiş için bir kan öğünü gereklidir⁴.

Tavuk akarları beslenmedikleri zamanlarda yuvalarda, çatlaklarda, yarıklarda ve altlıklarda saklanırlar.

Akar istilası insanlar ve tavuklar için bir sorun teşkil etmekte, yumurta üretiminde, yemden yararlanma verimliliğinde, canlı ağırlık artışında ve yumurta büyüklüğünde azalmaya neden olmakta ve ayrıca ölüm oranının artması, stres, kilo kaybı, anemi ve bağışıklığın zayıflaması gibi önemli hayvan sağlığı sorunlarına yol açmaktadır⁵.

Akar, bakteri ve virüslerin neden olduğu hastalıkları yayan bir dizi patojenik kanatlı enfeksiyonu için vektör görevi görebilir⁶.

İnsanlar çalışırken akarla temas ettiklerinde, PRM’nin insanları enfekte ettiği birkaç vaka kaydedilmiştir. İnsanlar akar tarafından ısırıldıklarında hafif tahriş, deri lezyonları ve dermatit gibi minör durumlar ortaya çıkmıştır. Bununla birlikte, PRM’nin temel özelliği zorunlu kan emici bir parazit olması olduğundan⁷⁻⁸, enfestasyon seviyesine bağlı olarak, uyku yoksunluğu nedeniyle artan ölümlere ve davranış bozukluklarına neden olabilir⁹⁻¹⁰.

Kanatlı akar istilalarından kaynaklanan ekonomik kayıplar, ticari yumurta endüstrisindeki verimliliği ciddi şekilde etkilemektedir.

Akar dünya çapında bir dağılıma sahiptir ve Avrupa çiftliklerinde ciddi sorunlara neden olmaktadır. Yumurta üretimi, büyüme oranı, yumurta üretimi ve yumurta kalitesindeki düşüşten etkilenmektedir¹⁰. Örneğin, yapılan kafesli barınak sistemi çalışması, PRM parazitliği nedeniyle ünitelerde ölüm oranının %1 ila %4 arasında değiştiğini ve yumurta üretiminin %10 azaldığını göstermiştir¹¹. Akar kontrolü ve üretim kayıplarının bir sonucu olarak PRM istilasının tahmini maliyeti yıllık 130 milyon Euro’dur¹². Yakın zamanda, de Jong ve van Emous (2017) Hollanda’da kırmızı akar istilasının mevcut toplam maliyetinin tavuk başına yıllık 0,60 € olduğunu tahmin etmiştir; bu da akar kontrolünün toplam maliyeti için 2005 yılına kıyasla yaklaşık %40’lık bir artışı temsil etmektedir.

Ekonomik kayıplara ek olarak, akar istilaları hayvanlarda büyük fizyolojik hasara neden olur. Önceki çalışmalara göre, verimlilik kayıpları tavuk başına yıllık 0,57 ila 2,50 €’ya ulaşabilmektedir¹³. Sadece Avrupa’da, yaklaşık toplam yıllık maliyet 360 milyon Euro’dur ve 300 milyondan fazla tavuk enfestasyondan muzdariptir, bu da yumurta üretim endüstrisinde ciddi ekonomik kayıplara ve tavuklarda sağlık ve refah sorunlarına neden olmaktadır¹⁴⁻¹⁵⁻¹⁶.

PRM’nin bilimsel kontrolü literatürde 20 yılı aşkın bir süredir tanımlanmaktadır¹¯¹⁷ ¯¹⁸. Şu anda, PRM’ye karşı mevcut ana tedaviler organofosfatlar ve piretroidler gibi sentetik nörotoksik akarisitlerdir¹⁹. Fluralaner gibi sistemik ektoparazit öldürücülerin ağızdan uygulanması yakın zamanda tavuklarda onaylanmıştır²⁰.

Hem insan sağlığı hem de çevre üzerindeki olumsuz etkileri nedeniyle sentetik akarisit kullanımına önemli kısıtlamalar getirilmiştir.

Ayrıca bazı nörotoksik maddeler kanserojen olabilir veya ruh sağlığını bozabilir²¹. Ayrıca veteriner ilaçları, kümes hayvanı altlığı şeklindeki organik gübre yoluyla tarla bitkilerine aktarılabilir²². Bugüne kadar, PRM’yi kontrol etmek için geleneksel olarak kimyasal tedaviler kullanılmıştır; ancak, akar istilalarını tedavi etmek için izin verilen sınırlı sayıda akarisit vardır²³. Buna ek olarak, yaygın olarak kullanılan akarisitlere karşı direnç, bunların etkinliğini azaltmaktadır²⁴. Veteriner hekimlikte akar tedavisi için kimyasal pestisitlerin klasik kullanımı, aktif bileşenlerin etkisizliği, akar direnci, çevrede istenmeyen kalıntılar ve hedef olmayan organizmalar için kabul edilemez riskler de dahil olmak üzere çok sayıda sorunlu zorluk ortaya çıkarmaktadır²⁵.

Bu sorunları çözmek için, mevcut kimyasal bazlı tedavilerin dezavantajlarının üstesinden gelmek için alternatif stratejiler gerekmektedir.

Kontrol

Bitkisel ürünler

Mevcut alternatif tedaviler arasında, bitkisel ürünler (doğal pestisitler veya fitokimyasallar olarak da bilinir) çevreye ve insan sağlığına daha az zararlı alternatif bir kontrol stratejisini temsil etmektedir.

Doğal ürünlerden elde edilen maddeler, kullanımlarına göre 2 kategoride gruplandırılır:

• Zararlı için toksik olan akarisitler
• Zararlıyı caydıran kovucular.

Önceki çalışmalar, bitki bazlı ürünlerin PRM’nin akarisit ve kovucuları olarak potansiyelini değerlendirmiştir.

• Zararlının konukçu tarafından işgal edilen bir alana girmesini önlemek için bir koku bariyeri oluşturarak
• Zararlıların hedef konukçu üzerinde uygun koşullar altında gelişmesini önleyerek bir zararlı ve konukçu arasındaki kimyasal etkileşimlere müdahale ederek

Bitki kaynaklı ikincil metabolitlerin kovucu olarak kullanılması, PRM için sentetik akarisitlere ilginç bir alternatiftir. Düşük çevresel kalıcılığa ve doğal bozunma yollarına sahiptirler ve hatta tarımda zararlı yönetiminin biyoçeşitlilik üzerindeki etkisini azaltırlar. Bununla birlikte, bunların haşere kontrolü için etkili bir şekilde uygulanması, bitkiye bağlı olarak düşük konsantrasyonlarda bile oldukça toksik özellikleri nedeniyle mekanizmalarının daha iyi anlaşılmasını ve ayrıntılı toksisite çalışmalarını gerektirir.

Aşılama

Aşılama aynı zamanda PRM kontrolü için yeni, çevre dostu ve umut verici bir alternatiftir ve pestisit kullanımının ve direncin azalması, çevreye ve hayvansal ürünlere bulaşmaması gibi birçok avantajı vardır. Rekombinant proteinler, konak hayvanları parazit türlere karşı bağışıklamak için kullanılmıştır. Örneğin, Bm86 rekombinant proteini, sığırları Boophilus microplus kene istilalarından koruyabilen ticari bir aşıdır. Bununla birlikte, PRM’yi oluşturan proteinler hakkındaki sınırlı bilgi nedeniyle aşı geliştirilmesi zordur.

Bu nedenle, son araştırmalar doğal düşmanlar, entomopatojenik mantarlar, nematodlar, bakteriyel endosimbiontlar, semiyokimyasallar ve büyüme düzenleyicileri dahil olmak üzere PRM’nin alternatif biyolojik kontrollerini keşfetmeye odaklanmıştır. Bu doğrultuda, sentetik pestisitler, feromonlar, uçucu yağlar, bitki kaynaklı bileşikler, aşılar ve biyolojik yaklaşımlar gibi organik maddeler de dahil olmak üzere bir dizi PRM kontrol yöntemi geliştirilmiştir. Ayrıca, inert toz veya mineraller ve dezenfektanlar gibi alternatif yöntemler, uzun süreli kalıntı toksisiteleri olmadan kümes hayvanı tesislerinde kullanılmıştır.

Bakış açısı

Bu derlemede, farklı PRM kontrol türlerine ilişkin mevcut bilgilere genel bir bakış sunulmaktadır. İlk olarak, akar istilasının klinik etkileri, PRM’nin halk sağlığı ve zoonotik hastalıklarda bir hastalık vektörü olarak rolü ve insan tıbbı ile ilgili açıklamalarla PRM istilasını tanıtılmaktadır. İkinci olarak, organik ve inorganik yöntemler kullanılarak PRM’nin geleneksel kontrolü özetlenmektedir. İncelemenin kapsamına odaklanmak için, PRM yönetiminde inorganik malzemelerin uygulanmasını ilerletmek için yapılan deneyler açısından PRM’nin fiziksel kontrolü ayrıntılı olarak tartışılmaktadır. Son olarak, herhangi bir toksisite olmaksızın potansiyel sürdürülebilir arıtma alternatifleri olarak uygulanabilecek, PRM’nin mekanizma temelli davranışı tarafından uygulanan inorganik malzeme seçimi için gelecek perspektifleri verilmektedir.

KANATLI KIRMIZI AKAR İSTİLASI

Klinik Etkiler ve Hastalık Vektörü Olarak Rolü

Klinik açıdan endişe verici olan, PRM paraziter enfestasyonunun kuş sağlığı ve refahı üzerinde neden olduğu etkilerin ciddiyetidir.

Doğrudan Etkileri

İstila edilmiş hayvanlarda ilk klinik belirti, tekrarlanan akar ısırıklarından kaynaklanan subakut anemidir. Yumurtlayan bir tavuk bir gecede kan hacminin %3’ünden fazlasını kaybedebilir. Aşırı durumlarda, PRM istilası tavukların şiddetli anemiden ölmesine neden olabilir.

İkincil Etkileri

Hematofag parazitliğin bu doğrudan etkisinin yanı sıra PRM, memelilerde (insanlar dahil) ve kuşlarda çeşitli bakteriyel ve viral patojenlerin de vektörüdür. Bunlar arasında Newcastle hastalığına neden olan paramiksovirüs, Doğu, Batı ve Venezuela at ensefalomiyelit virüsleri, kuş influenza A virüsü ve Escherichia coli, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella multocida, Salmonella gallinarum ve S. enteritidis gibi bakteriler yer almaktadır. Kanatlı akarları genellikle viral ve bakteriyel patojenler için uzun süreli konakçı görevi görür ve böylece bu patojenlerin rezervuarı haline gelir. Örneğin, doğu at ensefalomiyelit virüsü ve P. multocida, enfekte tavuklardan kan öğünlerinin alınmasından sırasıyla 30 gün ve 2 ay sonra akarlardan izole edilmiştir.

Zoonotik Hastalıkların Bulaşmasında PRM’nin Rolü

Tavuk sağlığını etkilemenin yanı sıra, PRM istilaları, akarın insanlar üzerinde tıbbi etkileri olan zoonotik bir hastalık vektörü olarak rolü nedeniyle halk sağlığı endişeleri de oluşturmaktadır.

Yukarıda açıklandığı gibi, PRM, bazıları insanlara bulaşabilen çeşitli kanatlı patojenlerinin bulaşmasında rol oynamaktadır. Zoonotik patojen S. enteritidis en yaygın zoonozlardan biridir ve nontifoidal salmonelloza neden olur. Bu hastalık en yüksek küresel insan ölüm oranına sahiptir ve gıda kaynaklı ve kümes hayvanı ürünlerinde en sık görülen hastalıklardan biridir. Salmonella, PRM’de 4 aya kadar dahili olarak yaşayabilir ve kümes hayvanlarına dış kutiküler temas, kan yeminin yutulması veya kanatlıların enfekte akarları tüketmesiyle bulaşır. Lyme hastalığının nedeni olan Borrelia burgdorferi ve kuş influenza A virüsü yakın zamanda PRM ile potansiyel olarak bulaşan zoonotik patojenler listesine eklenmiştir.

Zoonotik Riskler

Kanatlı kırmızı akarı, düşük konak özgüllüğüne sahip bir kuş ektoparazitidir.

Akarlar, doğal konakçı mevcut olmadığında insanlar da dahil olmak üzere memelilerden beslenebilir. Gamasoidoz olarak da adlandırılan insan parazitozu, ısırılan insanlarda tanımlanmıştır. Derideki eritematöz papüller ve ürtikeryal lezyonlar gamasoidozun olağan klinik belirtileridir ve bu lezyonlar vücuda dağılabilirken, daha sıklıkla kollarda, bacaklarda ve üst gövdede bulunur. İnsan gamasoidozu ile ilgili olarak, 2 epidemiyolojik senaryo (kentsel ve mesleki) tanımlanmıştır. Kentsel vakalardaki deri lezyonları, uzun maruziyet süreleri nedeniyle mesleki lezyonlardan daha şiddetli olma eğilimindedir ve sıklıkları son yıllarda artmıştır. PRM gamasoidozun en yaygın nedeni olmasına rağmen, tür belirlemenin zorluğu nedeniyle sıklıkla yanlış tanılar ortaya çıkmaktadır ve son araştırmalar güvercinlere özgü D. gallinae L1’in insan gamasoidozunda daha sık rol oynadığını göstermektedir.

Kırmızı Akarlar İnsan Hastalıklarında Giderek Artan Bir Endişe Kaynağıdır

Kanatlı kırmızı akar istilası, özellikle kanatlı hayvanlara yakın yaşayan veya çalışan insanlarda gamasoidoz adı verilen insan dermatolojik lezyonlarına neden olur. Gamasoidosis’in görülme sıklığı dünya çapında artarken, yakından ilişkili hastalıklar teşhis edilememektedir. Akarların neden olduğu hastalığın ciddiyeti, istilaların devam etmesi, sık tedavi başarısızlıkları ve daha önce açıklandığı gibi Borrelia burgdorferi, Babesia ve Bartonella gibi zoonotik hastalıkların potansiyel bulaşması ile daha da kötüleşmektedir. Örneğin, 58 Avrupa kümes hayvanı çiftliğinde çalışanlarla yapılan 2 yıllık bir ankette, birçok vaka yanlış teşhis edilmiş veya bildirilmemiş olsa da, %19’luk bir kontakt dermatit insidansı bildirilmiştir. Bu nedenle, gerçek insidans yaygın olarak varsayılandan daha yüksektir ve PRM istilasının “Tek Sağlık” girişimi için ciddi bir mesele olduğunu göstermektedir. Akar istilasının hem veterinerlik hem de insan sağlığı üzerindeki etkileri, Bilim ve Teknolojide Avrupa İşbirliği (COST) konferansının temel odak alanlarıdır. 2011 yılında bir grup Avrupalı araştırmacı, kırmızı akarların zoonotik ajanlar olarak rolleri nedeniyle kümes hayvanlarıyla çalışan bireyler için mesleki bir tehlike olarak dahil edilmeleri gerektiğini iddia etmiştir.

Inorganik Etken Maddeleriyle Geleneksel Kontrol

PRM enfestasyonlarını kontrol altında tutmak ve akarların bulaşmasını önlemek için, sentetik akarisitler kullanılarak PRM’nin geleneksel tedavisine büyük önem verilmiştir.

Ancak, bu kimyasal akarisitlerin kullanımı, insan tüketiciler için güvenlik düzenlemeleri nedeniyle sınırlıdır. PRM’deki direnç seviyeleri de artmıştır, bu da daha düşük bir etkinliğe işaret etmektedir. PRM’nin kontrolü için deneysel olarak sürdürülebilir çok sayıda araç benimsenmiştir ve bitki bazlı ürünler, bitki türevli bileşikler, aşılar ve biyolojik yaklaşımlar gibi alternatif kimyasal olmayan tedaviler olarak hala denenmektedir (aşağıdaki bölümlere bakınız). Ancak, bunların hiçbiri PRM’yi tedavi etmek için yeterince etkili görünmemektedir. PRM istilalarını kontrol etmek için tek sürdürülebilir çözüm, önceki raporlarda önerildiği gibi çok taktikli entegre zararlı yönetimi programları (IPM) kullanmaktır. Ancak uygulamada, bu yaklaşım kanatlı sektöründe hala çok sınırlıdır ve kısıtlıdır.

Kimyasal Yaklaşım

Organik bileşiklerle kimyasal muamele, PRM’nin büyümesini kontrol etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Burada, sentetik pestisitler ve uçucu yağları kısaca özetlenmektedir.

Petisitler

Akarisit seçimi, zararlıda direncin ortaya çıkmasını önlemek ve başarılı bir tedavi için önerilen dozajları optimize etmek için önemlidir. Ayrıca, hedef olmayan türler ve çevre üzerindeki yan etkiler önlenebilir ve azaltılabilir.

Ne yazık ki, mevcut hiçbir sentetik kimyasal ürün PRM için seçici değildir ve diğer böcekler ve araknidler üzerinde toksik etkiler gösterir. Sentetik akarisitlerin seçimi, PRM’ye karşı kullanım izni gibi uygulama kısıtlamaları ve biyosit veya veteriner ilaçları olarak sınıflandırılan ürünler için farklı düzenlemeler nedeniyle çok zordur. Bu ürünlerin tescilleri dinamiktir ve günlük olarak değişebilir, bu da düzenli olarak kontrol edilmelerini ve hatta bazı kısıtlamalarla üretim sırasında uygulamaları için onay alınmasını gerekli kılar.

Organofosfat phoxim (ByeMite R), yumurtacı tavuklar da dahil olmak üzere çiftlik hayvanları için ektoparazitlere karşı bir veteriner ilacı olarak ruhsatlandırılmıştır. Önceki bir çalışmada, tekrarlanan uygulamalardan sonra ByeMite R’nin çoklu sistemlerde yüksek etkinliği rapor edilmiştir, ancak phoxim’e karşı direncin ortaya çıktığı bildirilmiştir.

Son zamanlarda, PRM’ye karşı sistemik bir akarisit olarak fluralaner bazlı bir ürün olan Exzolt R, içme suyu yoluyla ağızdan uygulanmıştır; akarların, kenelerin ve böceklerin sinir sistemlerindeki ligand kapılı klorür kanallarını inhibe edebilir. Exzolt R akarları çok hızlı bir şekilde öldürmüştür (laboratuvar koşullarında 4 saat içinde) ve saha çalışmalarına dayanarak test edilen tüm birimlerde neredeyse anında %100 akar azalması meydana gelmiştir. Bununla birlikte, etkinlik süresi test edilen yumurtacı çiftlikler arasında 56 gün ile 238 gün arasında değişen büyük farklılıklar göstermiştir.

Esansiyel Yağlar

Kanatlı kırmızı akar kontrolü için mineral yağlar, mazot, petrol ve bitki yağlarının (kolza tohumu ve portakal) etkili kullanımı önceki in vitro çalışmalarda gösterilmiştir. Ancak bu yağların biyosit tescilinin olmaması nedeniyle şu anda PRM tedavisi için izin verilmemektedir.

Bu yağlar fiziksel stigmataya neden olur ve akarların normal solunumunu engeller. Bununla birlikte, yağların yumurtaları lekelemesi, yumurta kuşağını etkilemesi ve temizleme zorlukları gibi dezavantajları nedeniyle, çiftçiler tarafından yıllardır sadece bazı yağlar kullanılmaktadır. Akarlar yağ lekelerinden kaçınacağından, akar istilalarını başarılı bir şekilde kontrol etmek için yağlar bariyer olarak uygulanabilir.

Lundh ve arkadaşları, neem yağı olarak bilinen Azadirachta indica yağının, laboratuvar koşullarında %15 ila 20’lik bir konsantrasyonda düşük bir kovucu etkiyle ilişkili iyi bir akarisit etkisine sahip olduğunu göstermiştir.

Camarda ve arkadaşları bu yağın etkinliğini saha koşullarında test etmiştir. 3 nebülizasyondan sonra, %20 neem yağı formülasyonu (RP03), kümes hayvanı çiftliklerinde 1 hafta boyunca %94,65 ila %99,80 oranında akar azalmasına neden olmuştur.

Origanum (L.), Satureja (L.), Thymbra (L.) ve Thymus (L.) gibi Lamiaceae familyasından (Martinov) diğer uçucu yağlar da etkilidir. Bu cinslerdeki ana bileşik, %1’in üzerindeki konsantrasyonlarda PRM üzerinde toksik etkisi olan iyi bir akarisit adayı olan bir karvakroldür.

İn vitro temas biyo deneyleri sırasında, kekik ve lavanta yağları en yüksek kovucu aktiviteye sahip olmuş ve sırasıyla yağ ile muamele edilen yüzey alanının %80 ve %40’ı PRM tarafından engellenmiştir. Bununla birlikte, bu tür bir deney akarların koku veya temas ipuçlarıyla mı uzaklaştırıldığını ayırt etmek için kullanılamaz ve olfaktometrelerle tamamlayıcı çalışmalar gereklidir.

Artemisia sieberi (Besser) yağları, Myrcia oblongata yağı ve transverbenol yağları PRM üzerinde önemli bir kovucu etki göstermesine rağmen, bileşen bileşikler değerlendirilmemiştir.

Lee ve arkadaşları, 2 uçucu yağ (tarçın kabuğu ve karanfil tomurcuğu yağları) ve bunların bazı kurucu bileşikleri test edildiğinde, tarçın kabuğu yağından sinnamil asetat ve karanfil tomurcuğu yağından 2 bileşik (öjenol ve öjenol asetat) dışında PRM’ye karşı kovucu yetenek sergilediklerini bildirmiştir.

Camarda ve arkadaşları tarafından yapılan bir çalışmada, haftada 3 kez nebulizasyon yoluyla uygulanan PRM’ye karşı 2.400 ppm azadirachtin konsantre stoğundan seyreltilmiş %20 neem yağı formülasyonu araştırılmıştır. Akar popülasyonları birinci, ikinci ve üçüncü uygulamadan sonra sırasıyla %94,6, %99,6 ve %99,8 oranında azalma göstermiştir.

Neemin PRM’ye karşı güçlü biyoaktivitesi ilk uygulamadan 10 gün sonra en yüksek seviyeye ulaşmış ve etkileri 2 ay boyunca devam etmiştir. Tabari ve arkadaşları (2017), Artemisia sieberi uçucu yağını PRM’ye karşı araştırmış ve kovucu aktivite farklı zaman aralıklarında yetişkin akarlar üzerinde test edilmiş, ölüm oranının açık kaplarda kapalı kaplara göre önemli ölçüde daha yüksek olduğunu göstererek yüksek uçucu bileşenlerinin kilit rolünü vurgulamıştır.

Puvača ve arkadaşları kekik (Thymus vulgaris L.), lavanta (Lavandula angustifolia L.) ve kekik (Origanum vulgare L.) uçucu yağlarının PRM üzerindeki kovucu etkilerini kontrollü laboratuvar koşullarında araştırmıştır. En iyi sonuçlar 0.15 mg/cm3 dozunda lavanta uçucu yağı (72 saat sonra %96 ölüm) ve kekik (72 saat sonra %82 ölüm) için gözlemlenmiştir. Filtre kağıtlarına uygulandıktan sonra, kekik (72 saat sonra %100 ölüm) ve lavanta (72 saat sonra %78 ölüm) uçucu yağları sırasıyla 15 ve 30 gün boyunca önemli kalıcı toksik etkiler göstermiş ve PRM’ye karşı hem toksik hem de kovucu etkiler sergilemiştir. Mohammadyar ve arkadaşları sarımsak suyunun kanatlı kırmızı akarlarına karşı oldukça etkili olduğunu göstermiştir.

Biyolojik Mücadele

Biyolojik kontrol, gıda üretimi için yaygın olarak benimsenmektedir.

Spinosad (Elector R), akarların sinir sistemine etki eden biyolojik bir akarisit olarak rapor edilmiş ve organik tarımda kullanılmak üzere tescil edilmiştir.

Bu bölümde biyolojik organizmaları ve biyolojik maddeleri, feromonları/kairomonları, semiyokimyasalları/büyüme düzenleyicileri ve aşıları ele alıyoruz (Şekil 3 ve Tablo 2).

Doğal Düşmanlar

Doğal düşmanlar, yaşam ortamlarını paylaşan ektoparazitleri besin olarak kullanmak gibi PRM’yi kontrol etmek için umut verici çözüm adayıdırlar.

Bazı doğal düşmanlar ticarileştirilmiştir. Bu doğal düşmanlar, etkinliklerinin ölçülebildiği kontrollü kapalı sistemler kullanılarak kullanım alanına hapsedilebilir. Androlaelaps casalis, Hypoaspis aculeifer, Hypoaspis miles ve Stratiolaelaps scimitus (eski tanımı H. miles) yumurtacı kümeslerinde doğal olarak bulunur ve PRM’nin gerçek avcılarıdır, ancak PRM’nin spesifik avcıları değildirler, bu da uzun vadeli bir kontrol stratejisi olarak benimsenmelerini etkiler. Bununla birlikte, kümeslerdeki PRM düşmanlarının doğal toplulukları kanatlı kırmızı akarlarını kısmen kontrol edebilir. Kapalı sistemlerde, özellikle de kümeslerde, doğal düşman dağılımı kısıtlıdır. Doğal düşmanların saha performansı sıcaklığa bağlı olabilir ve alternatif haşere kontrol önlemleriyle sınırlı olabilir; ancak kümeslerde birçok tür rapor edilmiştir. Örneğin, gübrede yaşama eğiliminde olan hantal bir böcek olan histerid böceği Carcinops pumilio, kümes hayvanı üreticileri tarafından sıklıkla teşvik edilmektedir. Bu nedenle, yırtıcı omurgasızlar, IPM stratejisi dahilindeki uygulamaların bir kombinasyonunun parçası olarak umut vaat etmektedir.

Entomopatojenler ve Endosimbiyontlar

Entomopatojenik mantarlar, nematodlar ve bakteriyel endosimbiontlar, PRM’ye karşı kimyasal olmayan kontroller olarak potansiyele sahiptir

Ancak, kümeslerde kullanımlarının hala birçok sorunu vardır ve henüz ticari olarak mevcut değildir. Mantar sporları, konakçının kutikulasına yapışarak, çimlenerek, nüfuz ederek ve daha sonra laboratuvar ölçekli koşullar altında özellikle Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae ve Trichoderma album‘a duyarlı olan konakçının vücuduna yayılarak akarları enfekte eder. Bu çalışmalar, PRM sayılarında tedaviden sonra 4 hafta boyunca devam eden önemli bir düşüş olduğunu göstermiştir. Bununla birlikte, yarı ticari koşullarda yapılan bazı deneyler, mantar bulaşması için düşük nem seviyeleri ve kümeslerde düşük doz nedeniyle PRM’ye karşı yetersiz kontrol gösterirken, yalnızca PRM için seçicilik yoksa etkinlik büyük ölçüde mantar türüne bağlıdır. Ayrıca, bu organizmalar çevreyi olumsuz etkileyerek çevresel dengesizliğe yol açabilir. Nematodlar akar kontrol türleri olarak kullanılmıştır, ancak yüksek nem seviyeleri ve serbest su gibi belirli çevresel koşullara ihtiyaç duyarlar, bu da kümeslerde kullanımlarını çok zorlaştırır.

Endosimbiyotik bakteriler birçok eklembacaklı ile bir arada bulunur ve konakçının hayatta kalması için hayati önem taşır. Endosimbiyontlar PRM’nin kontrolü için de hayati öneme sahiptir ve büyümeleri araştırılmıştır. Bu simbiyoza katkıda bulunan simbiyozom bakterilerinin (ve mayaların) ortadan kaldırılması, yalnızca dikey transfer yoluyla yeri doldurulamaz şekilde edinilmeleri nedeniyle konak üreme ve büyümesinde dramatik düşüşlere neden olmuştur. Endosimbiyotik bakteriler, sitoplazmik uyumsuzluğa neden olarak ve oogenezi bozarak konak üreme potansiyeli üzerinde zararlı etkiler yaratabilir. Bazı endosimbiyotlar DNA dizilimi ile PRM’de tanımlanmış olsa da, pratikte bir tedavi olarak uygulanabilmeleri için ek çalışmalara ihtiyaç vardır.

Bitkisel Bileşikler

Akarisit ve toksik aktivitenin yanı sıra kovucu veya çekici etkileri olan bitki kaynaklı ürünler, PRM’ye karşı alternatif kimyasal olmayan yöntemler olarak umut verici bir potansiyele sahiptir.

Bitki bazlı ürünler çoğunlukla memeliler için düşük toksisiteye, kısa çevresel kalıcılığa ve çevre üzerindeki düşük etkilere sahiptir, bu da onları IPM stratejilerinde kullanım için uygun hale getirir. Önceki bölümde, bitki kaynaklı uçucu yağların PRM’ye karşı etkinliğinin esas olarak mekanik bir etkiden ziyade nörotoksik bir etki sergileyen uçucu bileşenlerinden kaynaklandığını gösterdik. Ayrıca, bitki bazlı ürünlerin etkinliği nem, toz ve kullanılan diğer pestisitler gibi çevresel faktörlerden etkilenebilir.

Bugüne kadar, Commiphora holtziana spp. holtziana (gum haggar), Conocarpus erectus özütleri ve Cnidium officinale‘nin PRM’ye karşı itici olan metanolik özütleri ve fraksiyonları dahil olmak üzere en az 15 farklı botanik aileden bitki türü test edilmiştir. Bu maddelerin kovucu aktivitesinin hedef olmayan organizmalar için nispeten güvenli olması beklenmesine rağmen, aynı bitki türlerinden elde edilen kimyasal bileşikler, çalışılan partiler arasında nitelik ve nicelik bakımından farklılık göstermiştir. Çoğu çalışma bitki ekstraktlarının akarisit özelliklerine odaklanmıştır. Rajabpour ve arkadaşları, Conocarpus erectus‘un sucul ve etanolik ekstraktlarının PRM için kovucu olduğunu göstermiştir. Kim ve arkadaşları, Cnidium officinale‘nin rizomundan elde edilen metanolik ekstrakt ve fraksiyonların PRM üzerinde %91,3 kovucu aktivite sergilediğini göstermiştir. C. officinale köklerinden izole edilmiş bir bileşik olan (Z)-ligustilide üzerine yapılan ek bir çalışma, bir T-tüpü olfaktometresi kullanılarak neredeyse %100 itici tepki göstermiştir. Ayrıca, Portulaca oleracea, Pistacia atlantica ve Terminalia chebula Retz. ekstraktları Oligonychus caffeae’ye karşı botanik akarisit olarak kullanılabilir. Bazı bitki bazlı akarisitler, bazı ülkelerde yumurtacı kümeslerde kullanılmak üzere ticari olarak mevcuttur. Örneğin, neem tohumu (Azadirachta indica) ekstraktından oluşan MiteStop R (Alpha-Biocare GmbH, Neuss, Almanya), PRM’ye karşı in vitro ve tarla koşullarında etkinliği kanıtlanmıştır.

Kekik (Thymus spp.), dulavratotu (Arctium spp.) ve solucan otu (Tanacetum vulgare) gibi bitki ürünlerinin kovucu doğası, içme suyu katkısı olarak kullanıldığında kuşlarda PRM’yi kontrol etme etkinliklerinin arkasında yatıyor gibi görünmektedir. Bunların entegre bir yaklaşımla kullanılması, akarisitlere karşı daha duyarlı olan PRM kontrolü için özellikle etkili olabilir. Bununla birlikte, PRM kontrolünde bitki bazlı ürünlerin kullanımı, göreceli bir standardizasyon eksikliği ve bunun sonucunda tutarsız etkinlik ile ilişkilidir.

Feromonlar ve Kairomonlar

Uçucu organik bileşikler (VOC’ler), akar popülasyonlarını kontrol etmek için klasik akarisitlere ilginç bir alternatiftir.

Bu amaçla feromonlar ve kairomonlar gibi çeşitli VOC türleri tanımlanmış ve özellikleri incelenmiştir Feromonlar, aynı türün diğer bireylerinin davranışlarını etkileyen moleküllerdir. Toplanma feromonları, olgunlaşmamış dişi feromonları, dişi cinsiyet feromonları ve alarm feromonları dahil olmak üzere çeşitli feromonların akarları çektiği düşünülmektedir. Etkilerini anlamak için feromonal karışım içindeki moleküllerin tanımlanması ve miktarlarının belirlenmesi analiz edilmiş ve akarların tanımlanan moleküllerin tamamı veya bir kısmı ile karşılaştıklarında davranışlarını karakterize etmek için ek testler yapılmıştır.

Akarların toplanma feromonları, farklı gelişim evrelerindeki beslenmeyen konspesifik akarların güvenli bir ortamda toplanmasına neden olur. Entrekin ve Oliver, bu davranışı tetikleyebilecek 2 olası nedeni incelemiştir: thigmokinesis ve bir toplanma feromonunun salınması. Her iki uyaran da akar kümelenmesini etkilemiştir; ancak kimyasal uyaranlar daha etkin bir şekilde kümeler oluşturmuştur. PRM ile kümelenme olgusu Koenraadt ve Dicke tarafından değerlendirilmiştir; 2 grup konspesifik akarın çekiciliği, hem beslenen hem de beslenmeyen akarların beslenen konspesifikler tarafından yayılan uçucular tarafından çekildiğini göstermiştir. Bu bulgu, Entrekin ve Oliver tarafından yapılan ve akar kümelenmesinin beslenmeden sonra arttığı önceki bir çalışmayla tutarlıdır. Koenraadt ve Dicke, beslenmemiş akarların beslenecek bir konak bulmak için motive olduklarını, beslenmiş akarların ise kan öğününden sonra saklanacak ve üreyecek bir yer aradıklarını öne sürmüştür. PRM’nin toplanma feromonunun, diğer akar türlerinde gözlemlendiği gibi sadece 1 veya birkaç molekülden oluştuğu sonucuna varılmıştır. Örneğin lardolure, Caloglyphus polyphyllae ve Lardoglyphus konoi akarlarında tespit edilen tek toplanma feromonudur.

Alarm feromonları, güvensiz bir ortam tarafından strese sokulduğunda veya yaralandığında bir birey tarafından yayılır. Düşük konsantrasyonlardaki alarm feromonlarının algılanması, hayatta kalma stratejileri olarak akarlarda çekim ve kümelenme davranışlarına neden olabilir. Belirli bir konsantrasyonun üzerinde feromon itici hale gelerek dağılma ve saklanmaya neden olur. Bugüne kadar, PRM’de alarm feromonlarının davranış üzerindeki emisyonu çalışılmamıştır; ancak, neral ve neril format gibi çeşitli bileşikler diğer stigmatid akar türlerinde tanımlanmıştır. Akarlar (Schwiebea elongata), filtre kağıdına 1 ve 3 ng gibi düşük dozlarda uygulandığında neralden etkilenmiştir; ancak daha yüksek dozlarda (30 ng) akarlar itici davranış sergilemiştir. Neril format, Tyrophagus putrescentiae dahil olmak üzere çeşitli türlerde tespit edilmiştir ve alarm davranışına yol açmaktadır. Bununla birlikte, yüksek dozlarda neril format (10 ve 100 ng) D. farinae ve D. pteronyssinus gibi diğer türleri de cezbetmiştir, bu da bir agregasyon feromonu olarak da hareket edebileceğini göstermektedir. Bu nedenle, düşük dozlarda akarları çeken alarm feromonları ile tüm dozlarda akarları çeken agregasyon feromonlarını karşılaştırmak önemlidir.

Akarlarda iki tür cinsiyet feromonu tespit edilmiştir: 1) sadece dötonimflerin yayabildiği olgunlaşmamış dişi feromonları ve 2) dişi cinsiyet feromonları. Üreme sırasında erkek akarlar, deutonimf dişiler tarafından yayılan ve Tetranychus urticae’de sitronellol, farnesol ve nerolidolden oluşan olgunlaşmamış feromon imzası ile deutonimfler ve protonimfler arasında ayrım yapar. Bununla birlikte, bu olgunlaşmamış dişi feromonu PRM’de tanımlanmamıştır ve normalde sadece dişi cinsiyet feromonları, yüksek üreme başarısı sağlamak için tercihen beslenen erkekleri çekmek için salınır. Bazen, dişi cinsiyet feromonu erkekler tarafından da salınabilir ve bu da erkekler arasındaki montaj davranışını açıklar. Dişi cinsiyet feromonları PRM’de çalışılmamış olsa da, yakın akraba türlerde tanımlanan farklı bileşikler potansiyel adaylar olabilir. Örneğin, 2-hidroksi-6-metilbenzaldehit Acarus immobilis, Aleuroglyphus ovatus, Cosmoglyphus hughesi ve D. farinae gibi farklı türlerde kullanılmaktadır. Cinsiyet feromonları ve kümelenme feromonları arasındaki sinerjik etkiler de potansiyel olarak PRM’yi kontrol etmek için kullanılabilir.

Yarıkimyasallar ve Büyüme Düzenleyiciler

Konakçıyla ilişkili kairomonlar cezbedici olarak hareket edebildiğinden, ördeklerden elde edilen itici bir allomon da PRM’yi kontrol etmek için bir alternatif olabilir.

Ördeklerin üropigial bezinden elde edilen bu itici allomon sentezlenmiştir ve ticari olarak mevcuttur. Herhangi bir cezbedici/itici yaklaşımda önemli bir husus, çok sayıda yavaş salınım mekanizması kullanılarak uygulanan ürünün uçuculuğudur. Ancak, bu özelliğin PRM kontrolünde cezbedici ve/veya kovucularda kullanılması pek olası değildir.

Büyüme düzenleyicileri ya omurgasız dış iskeletlerinin (kitin) yapı taşlarının oluşumunu bozar ya da juvenil hormonu taklit ederek veya inhibe ederek olgunlaşmaya müdahale eder ve sırasıyla pupaların veya yetişkinlerin gecikmiş veya erken gelişimine yol açar. Büyüme düzenleyicileri ticari olarak mevcuttur ve son zamanlarda PRM’yi kontrol etmek için kullanılması düşünülmektedir. Örneğin, triflumuron kitin inhibitörü olarak embriyonik gelişimi bozarak yumurtadan çıkmayı azaltabilir ve akarisitlerle birlikte kullanıldığında akarları kontrol etmede etkili bir strateji olarak potansiyel kullanımını gösterir. Triflumuron şu anda kümes hayvanlarında kullanım için mevcuttur ve Birleşik Krallık’ta barındırılan evcil hayvanların zararlılarına karşı genel kullanım için pazarlanmaktadır.

Aşılar

Aşılar akarisitlere karşı cazip bir alternatiftir; ancak eklembacaklılara karşı aşı geliştirilmesi, gerekli zaman ve konakçıda yeni bağışıklık reaksiyonu tepkilerinin potansiyel indüksiyonu nedeniyle çok zordur.

PRM’ye karşı aşıların geliştirilmesi, akar-konak ilişkisinin yeterince anlaşılamaması nedeniyle engellenmektedir. Buna ek olarak, literatürde PRM’ye karşı aşı geliştirilmesini detaylandıran çok az rapor bulunmaktadır. Kuşların somatik PRM antijenleri veya Dermatophagoides pteronyssinus gibi diğer akar türlerinden homolog proteinlerle aşılanması denenmiş olsa da, akarlarda önemli bir ölüm oranı ölçülmemiştir. Yakın zamanda PRM’nin genomik ve transkriptomlarında ilerlemeler kaydedildiğinden, aday antijenlerin araştırılması da dahil olmak üzere PRM aşılarının geliştirilmesi ivme kazanmıştır. Birçok çalışma, aşılama için hem doğal (otojen) hem de rekombinant antijenlerin potansiyelini göstermiştir; ancak otojen aşılar ve etkili antijen(ler) iyi tanımlanmamıştır. Başka bir deyişle, otojen aşıların etkinliği ölçülmemiştir ve bu da partiler arasında farklı sonuçlar elde edildiğini göstermektedir.

Bu zorluklara rağmen, hem otojen aşının hem de prototip rekombinant aşının yakın zamanda yapılan bir saha değerlendirmesinde, otojen aşı akar popülasyonunda %78’lik bir azalmaya yol açarken, rekombinant aşı önemli bir etkinlik göstermemiştir. Somatik akar proteinlerinin kullanımına alternatif bir yaklaşım, tavukların kenelerden (Bm86) veya sivrisineklerden (subolesin) elde edilen rekombinant proteinlerle aşılanmasıdır. PRM’nin in vitro mortalitesinin Bm86 ve subolesin ile aşılanmış gruplarda sırasıyla %23 ve %35 olduğu bildirilmiştir. Dg-HRF-1 (D. gallinae histamin salım faktörü proteini) ve Dg-CatD-1/Dg-CatL-1 (rekombinant katepsin D-/L benzeri proteinazlar) kullanılarak PRM’ye karşı bir aşı adayını araştırmak için genomik bir yaklaşım kullanılmıştır. Ayrıntılı olarak, tavukların Dg-HRF-1 ile aşılanması, in vitro olarak test edildiğinde poliklonal IgY ile spike edilmiş kan kullanılarak PRM mortalitesinde %7’lik önemli bir artış sağlamıştır. Dg-CatD-1 tedavi grupları Dg-CatL-1 gruplarından daha etkiliydi ve ölüm oranı ilk akar beslemesinden 120 saat sonra kontrol gruplarından önemli ölçüde daha yüksekti. Bu çalışma, PRM’ye karşı somatik veya rekombinant proteinlere dayalı bir aşı geliştirme potansiyelini ortaya koymuştur. Ancak, ticari olarak kullanılabilir bir aşının geliştirilip piyasaya sürülebilmesi için önemli teknik engellerin aşılması gerekmektedir.

İnorganik Maddelerle Fiziksel Kontrol

İnorganik malzemeler, su ve yağ adsorpsiyon bileşenlerinden türetilen membran kütikülünü dehidre ederek PRM’yi fiziksel olarak kontrol etmek için kullanılabilir.

Ayrıca, birkaç malzemenin birleştirilmesi istenen fiziksel kontrol etkisini artırabilir. PRM’ye maruz kalma sırasında, her bir inorganik malzeme rastgele dağıtılabilir, PRM yüzeyine adsorbe edilebilir ve lokalize bir bölme haline getirilebilir. Bu nedenle, inorganik malzeme çevre ile etkileşime girebilir ve PRM’deki su emilimini etkileyerek fiziksel hasara yol açabilir. İnorganik malzemelerin bu spesifik özellikleri PRM’nin kontrolünde önemli bir avantajdır. Buna ek olarak, her bir inorganik partikülün keskin kenarı, akarların kümes hayvanlarına erişimini engelleyerek stresli bir ortam yaratır ve kümes hayvanlarının bulunduğu bölgeden başka bir bölgeye hareket etmesini önler. Bu inorganik malzemelerle ilgili detaylı çalışmalar bir sonraki bölümde ele alınmaktadır.

Diyatomlu toprak (DE), kaolin kili, talk ve silika gibi inert tozlar, PRM’nin tedavisi için aktif biyosidal maddeler olarak işlev gören mevcut inorganik malzemelerdir. Kaolin kili ve talk doğadan elde edilebilen mineral malzemelerdir, silika ise DE gibi sentetik ve doğal formlarda bulunabilir (Tablo 3). Bazı bölgelerde organik çiftliklerde sadece doğal silika kullanılabilmektedir. Silikanın kristal yapısına bakıldığında, amorf fazın nispeten toksik olmadığı düşünülürken, kristal formun çevre, hayvanlar ve insan sağlığı için daha zararlı olduğu görülmektedir. Bununla birlikte, silikanın PRM’ye karşı etki şekli tamamen mekaniktir ve akarların dış iskeletinin epikütikülünü kurutarak etki eder ve silikon dioksitin emici karakteri nedeniyle akar hücre zarının kurumasına yol açar. Ayrıca, bu fiziksel reaksiyona karşı direnç gelişmesi, tek hedefli moleküllere göre daha az olasıdır. Toz ince partiküllerden oluştuğundan ve insanların solunum yolları üzerinde olumsuz etkilere neden olabileceğinden, sıvı silika bazlı ürünlerin kullanımı bu zararlı etkileri azaltmak için bir alternatiftir. Bununla birlikte, sıvı kurutulduğunda ve tavuklar tarafından daha fazla dağıtıldığında bazı silika partikülleri havada asılı kalabilir. İn vitro olarak DE, sentetik silikadan daha etkili görünmektedir, ancak saha çalışmaları sıvı silikanın DE’den daha uzun süreli bir etkiye sahip olduğunu göstermiştir. PRM’ye karşı etkili olmalarına rağmen, inorganik malzemelerle fiziksel kontrol, inorganik malzeme kıtlığı ve emilim, kimyasal bileşim, partikül boyutu ve spesifik yüzey dahil olmak üzere malzemenin özelliklerindeki değişkenlik gibi çeşitli sorunlar nedeniyle hala çok erken bir aşamadadır.

Doğal İnorganik Maddeler

Doğal inorganik malzemeler PRM için fiziksel kontrol stratejisi olarak yaygın bir şekilde kullanılmaktadır.

Pratikte, bu malzemeler ticari olarak mevcuttur ve gerçek saha testlerinde kullanılmalarına izin verilmektedir; ancak bunlar yalnızca tedaviye dayalı etkinlik için etkilerini göstermiştir. Etki mekanizmalarını anlamak için her bir materyalin özellikleri ve fizikokimyasal karakterizasyonu açısından sınıflandırılması ve ayrıntılı olarak incelenmesi gerekmektedir. Burada DE, kaolin kili ve talkın bileşimi ve özellikleri özetlenmekte ve tartışılmaktadır.

Diyatomlu Toprak

Diyatomlu toprak, saf DE ile diğer doğal kil ve minerallerin karışımına bağlı olarak farklılık gösterir. Doğal DE yataklarında, çökelme koşullarına bağlı olarak farklı miktarlarda silika mevcuttur. Diyatomlu toprak parçacık boyutları 3 μm’den fazla ile 1 mm’den az arasında değişir, ancak tipik olarak 10 ila 200 μm’dir ve düşük yoğunluk ve yüksek gözenekliliğe sahiptir. Fırında kurutulmuş DE’nin tipik kimyasal bileşimi %80 ila 90 silika, %2 ila 4 alümina ve %0,5 ila 2 demir oksittir. Bugüne kadar kümes hayvanlarına uygulanan doğal DE ürünleri Insecto (Natural Insecto Products, Costa Mesa, CA), Diamol (O.W.A. Kemi, Skanderborg, Danimarka), SilicoSec (MiljøXuen, Gandrup, Danimarka) ve sentetik amorf silika ProtectIt (Hedley Technologies, Ontario, Kanada) ve Fossil Shield 90.0 (FS 90.0, Bein, Eiterfeld, Almanya) ile modifiye edilmiş DE ürünleridir.

Kilpinen ve arkadaşları 2 etkinlik testi tasarlamıştır: buharlaşma ve tarsal maruziyet. Buharlaşma testi için 100 akardan oluşan gruplar cam şişelerde toplanmış ve 25°C’de sabit bağıl nem (%75 veya 85) ve doymuş çözeltiler (NaCl veya KCl) içeren kapalı bir kutuya yerleştirilmiştir (Kilpinen ve Steenberg, 2009a). Değişken aralıklarla cam şişeler ayrı ayrı tartılmış, akarların başlangıçtaki ağırlığına göre nispi ağırlık kayıpları hesaplanmış ve her şişedeki ölü akar sayısı tahmin edilmiştir. Tarsal maruziyet testinde, akarlar işlenmiş su kağıdı diskleri üzerinde farklı dozlarda DE’ye maruz bırakılmıştır. 24 saat sonra, işlenmiş kağıt üzerinde kalan akarlar aynı nem koşullarına sahip plastik kutularda tutulmuş ve yaklaşık 2 hafta boyunca veya tüm akarlar ölene kadar her gün ölüm oranı gözlemlenmiştir. Buharlaşma deneyinde, hem ağırlık değişimi hem de ölüm skoru için veriler elde edilmiştir. Ölüm skorları bir probit modeline uydurulmuş ve akarların %50’si ölene kadar (ortalama ölüm süresi veya LT50) tedaviyi takiben hesaplanan değerler verilmiştir. Tarsal maruziyet testlerinden elde edilen veriler, her bir deneysel koşul için LT50 hesaplanarak analiz edilmiştir. Bu analizler, büyük miktarda su içeren maksimum DE dozu da dahil olmak üzere, çoğu DE dozunun %75 bağıl nem (RH) ve 25°C’de 24 saat içinde neredeyse tamamen su kaybına neden olduğunu kanıtlamıştır. DE ile muamele edilen akarlarda ilave su kaybı, akar kütikülası boyunca buharlaşmadan kaynaklanmaktadır. Bununla birlikte, tarif edilen deneyde, akarların ölmeye başladığı geçiş noktasında daha hızlı etkili uygulamalarda ağırlık değişiklikleri artık tespit edilememiştir. Genel olarak, modifiye DE saf DE’den daha yüksek etkinliğe sahipti. LT50 değerleri karşılaştırıldığında saf DE, ProtectIt kadar etkiliydi ve SilicoSec, Şekil 4’te gösterildiği gibi akarları saf DE ve Diamol’den önemli ölçüde daha hızlı öldürdü. Bu, yüksek oranda silikon dioksit içeren inert tozun pestisidal etkilere sahip olabileceğini göstermektedir. Test edilen en etkili ürün için, akarların 24 saat boyunca işlenmiş yüzeylere maruz bırakılması, akarların bir günden daha kısa bir süre içinde öldürülmek için yeterli ürünü alabildiğini doğrulamıştır. Bu çalışmada uygulanan dozlar genellikle şirketler tarafından önerilenlerden çok daha düşüktü. Örneğin, Fossil Shield için önerilen uygulama oranı kafes sistemlerinde yumurtacı tavuk başına 1 ila 3 g’dır ve bu oran in vitro koşullarda uygulanandan oldukça yüksektir. Bu durum, akarların düşük dozda inert toza karşı duyarlı olduğunu ve uygulama yapılan yüzeylerin çevresel toz ve döküntülerle kaplı olduğunu göstermektedir. Insecto ve Diamol için yaklaşık %20’lik akar ağırlık kayıpları kaydedilmiştir (sırasıyla %18,2 ve %21,1). ProtectIt (%25,9) ve SilicoSec (%27,9) için biraz daha yüksek değerler elde edilmiştir. Son olarak, FS 90.0 %37,3 ile en yüksek ağırlık kaybına neden olmuştur. LT50 verileri, yüksek ağırlık kayıplarının düşük LT50 değerleriyle sonuçlandığını ve bunun tersinin de geçerli olduğunu göstermiştir. Dikkate alınması gereken önemli bir faktör de nemdi; inert tozun kütikülün koruyucu mum tabakasını yok etme etkisine ilişkin genel teori, ortamdaki nem koşullarına bağlı olarak uzamaktadır. Ancak, DE etkinliği ile nemdeki küçük değişiklikler arasında belirgin bir ilişki bulunmamıştır.

Mullens ve arkadaşları, tedaviden önce 3 ila 5 hafta boyunca başlangıçta 20 ila 30 yetişkin kuzey kümes akarı (NFM) ile istila edilen gagası kesilmiş, kafesli yumurta tavukları (25-45 haftalık) kullanmıştır. Daha sonra, 60 g DE 1) 440 mL deiyonize su, 2) deiyonize suyla seyreltilmiş kükürt (Deneme 1’de %15,6 ve Deneme 2’de %5,3 kükürt) veya 3) düşük konsantrasyonda kükürt içinde dağıtılarak DE uygulamaları hazırlanmıştır. Tavuklar, malzemenin süspansiyon halinde kalmasını sağlamak için elde taşınan bir sprey şişesi veya 6-L pompa basınçlı (bahçe) püskürtücü kullanılarak bu solüsyonlarla muamele edilmiştir. Kullanılan DE formülasyonu, ortalama partikül boyutu 8 ila 12 μm olan %92 SiO2 içeren SilicoSec’tir. Sıcaklık, belirli bir DE formülasyonunun akarlara karşı etkinliğini belirlemede önemli bir rol oynar. Genel olarak, sıcaklık hareketliliği artırarak kütikulaya daha fazla DE partikülünün bağlanmasına neden olur. Bu DE formülasyonuyla, akarları kontrol altına alan bir DE seviyesine ulaşmak için 2 ardışık haftalık uygulama gerekmiştir (deneme 2’nin 10. haftası). Diyatomlu toprak, saklanma yerlerine (çatlaklar ve yarıklar) iyice uygulandığında PRM’nin bastırılmasında etkili olabilir ve aynı durum insan konutlarını istila eden NFM için de gösterilmiştir. Diyatomlu toprak sıvı formülasyonları tavuklara elle kolayca uygulanabilir, ancak daha büyük ölçekte kullanımını değerlendirmek için daha fazla test yapılması gerekmektedir. Diyatomlu toprak bulamaçları birçok tipik pestisit püskürtücüsünü kolayca tıkayabilir veya zarar verebilir, sülfür gözleri ve akciğerleri tahriş edebilir ve DE tozlarının soluma riskleri vardır.

Maurer ve arkadaşları 3 farklı sıvı DE formülasyonunu (saf DE, D1; uçucu yağlarla DE, D2; ve piretrumla DE, D3) in vitro olarak denemişlerdir. Beş yetişkin dişi akar, 3 sıvı test ürünüyle muamele edilen plastik şişelere aktarılmış ve akarların hayatta kalması 4, 24 ve 168 saat sonra gözlemlenmiştir. Çiftlik deneylerinde, akarlar muamele uygulamasından önce 4 gün boyunca ve muameleden sonraki 3 ve 4 gün boyunca örneklenmiştir. D1 ve D3 uygulamaları akarların hızla ölmesine neden olurken, D2 in vitro ortamda önemli ölçüde daha az etkili olmuş ancak yine de kontrolden daha etkili olmuştur. D2 ile diğer uygulamalar arasındaki fark, farklı kalitelerde DE kullanılmış olmasıydı; bu da hammadde kalitesinin DE ürünlerinin etkinliğini etkileyen baskın faktör olduğunu gösteriyordu. DE’nin bu etkisi, uygulama şekline bakılmaksızın nispeten küçüktü. Pratik deneyimler, tekrarlanan uygulamalarla iyi akar kontrolünün sağlanabileceğini göstermiştir. Çiftlik ve in vitro çalışmalar arasındaki farklı sonuçlar daha fazla araştırma gerektirmektedir.

Alves ve arkadaşları, laboratuvarda sıvı bir DE formülasyonunun akarisidal aktivitesini ve sahada mekanik temizlik ile ilişkisini hazırlamış ve değerlendirmiştir. Mekanik temizlikle ilişkili tedavi için %10’luk bir DE sıvı preparatı uygulanmıştır. İlk DE uygulamasından kırk iki gün sonra, başlangıçtaki akar popülasyonuna kıyasla %94,7’lik bir popülasyon azalması gözlenmiştir. Bu sonuçlar, mekanik temizlikle birlikte DE uygulamalarının PRM’yi etkili bir şekilde kontrol etmek için bir alternatif olabileceğini ve bunun da kimyasal akarisit kullanımından kaynaklanan akar direncinin önlenmesine katkıda bulunabileceğini doğrulamaktadır. DE formülasyonunun etkisinin tekrarlanan uygulamalardan sonra azaldığı gözlemlenmiştir; bu durum sürü yaşı veya yumurtacı kümeslerde zaman içinde formül birikimi ile ilişkili olabilir ve etkinliğini engelleyebilir. Bu sorun, akarisit etkilerinin etkinliğini arttırdığı kanıtlanmış olan DE uygulamasından önce yüzeylerin mekanik olarak temizlenmesiyle aşılabilir.

Kaolin Kili

Kaolinit mineralleri ve kaolinit bakımından zengin kayalara , kağıt, kauçuk ve boya endüstrilerinde önemli bir bileşen olan beyaz yumuşak bir kil olan kaolin veya çin kili adı verilir. _{Kaolinit, Al 2} Si ₂ O ₅ (OH) ₄ ve oksijen atomları yoluyla 1 oktahedral alümina tabakasına ( AlO ₆ ) bağlanan 1 tetrahedral silika tabakasından ( SiO _{4 ) oluşan katmanlı bir} silikat mineral yapısından oluşur. Kaolin, kuru formülasyonlarda taşıyıcı veya seyreltici olarak yaygın şekilde kullanılan gözenekli, inert bir bileşiktir. Kimyasal ve mikrobiyal pestisitlerin akarlar üzerinde öngörülen sınırlı etkisi, kaolinin akarların kontrolünde yararlı bir alternatif olabileceğini göstermektedir.

Kilpinen ve ark. üstel buharlaşma modelini kullanarak kaolinin etkinliğini en yavaş etkili işlemlerle karşılaştırdı. Kaolin uygulamaları akarları daha hızlı öldürdü ve deney süresi boyunca akar ağırlığı değişikliklerinin iyi bir şekilde tahmin edilmesini sağladı. 24 saat sonra ağırlık kaybı ve LT50 _değerleri , her iki RH seviyesinde farklı tedavi türleri için önemli ölçüde farklılık gösterdi. En düşük nemde kaolin, kontrol grubuyla (%9,5) karşılaştırıldığında 24 saat sonra biraz daha yüksek ağırlık kaybına (%11,9) neden oldu. %85 bağıl nemde ağırlık kayıpları daha azdı ve LT50 _değerleri daha yüksekti. _LT50 değerlerine ve ağırlık değişimi verilerine dayanarak , _LT50 daha düşüktü ve ağırlık değişimi %75 RH’de %85 RH’ye göre daha yüksekti. Kaolin uygulamasının yumurta üretimi üzerinde gözlemlenebilir bir etkisi olmamıştır.

Mullens ve arkadaşlarının testleri. kaolin kilinin test edilen DE formülasyonundan önemli ölçüde daha etkili olduğunu gösterdi. Kaolin kili muameleleri, 440 mL deiyonize su veya deiyonize su ile seyreltilmiş %5.3 kükürt içindeki 60 g kil çözeltileri içerisinde süspanse edildi; kükürt muamelesi yalnızca 3. haftada uygulandı. Tavuklar 12 hafta boyunca haftalık olarak ve 14 haftada tekrar puanlandı. Kaolin kili akarları kontrol etmede çok daha etkiliydi. Tekli kaolin uygulamaları NFM’yi 1 ila 2 hafta boyunca önemli ölçüde azalttı ve ardışık 2 haftalık uygulama, bunları 2 ila 3 hafta boyunca kontrol etti. Kaolin kili, organik durumlarda bitki zararlılarına karşı sıklıkla kullanılır.

Talk

Talk veya talk, Mg3Si4O10(OH)2 kimyasal formülüne sahip hidratlı magnezyum silikattan oluşan bir kil mineralidir. Bu mineral kalınlaştırıcı ve yağlayıcı olarak kullanılır. Akarlar üzerinde yapılan bazı deneylerde, gözenekli yapıları ve işlevleri nedeniyle kaolin ve talk karşılaştırma için dahil edilmiştir. Şimdiye kadar çok az çalışma yapılmış ve tartışılmıştır.

Kilpinen ve arkadaşları en yavaş etkili talk uygulamalarını karşılaştırmıştır. Yaklaşık akar ağırlık değişimi verileri, akarlar ölmeye başlayana kadar deney süresi boyunca iyi uyum göstermiştir. Talk, kontrol grubundan biraz daha yüksek ağırlık kaybına (%12,1) neden olmuştur (kontrole kıyasla %25’lik bir artış). Nemin hem LT50 değerleri hem de ağırlık değişimi verileri üzerinde önemli etkileri olmuştur; LT50 %75 bağıl nemde %85 bağıl neme göre daha düşük ve ağırlık değişimi daha yüksektir. Bununla birlikte, kaoline benzer şekilde talkın yumurta üretimi üzerinde bir etkisi olmamıştır.

Sentetik İnorganik Maddeler

Sentetik inorganik malzemeler PRM’yi kontrol etmek için fiziksel alternatifler olabilir. Pratik olarak bu ürünler ticari olarak temin edilebilir ve PRM ile etkileşimlerini etkileyebilecek çeşitli yapılara, yüzey alanlarına ve gözenek boyutlarına/hacimlerine sahiptir. Kontrol mekanizmalarının anlaşılmasına yardımcı olmak için her malzeme türünün fiziksel özellikleri tartışılmış ve karşılaştırılmıştır. Özellikle su veya yağ adsorpsiyon özellikleri PRM’nin fiziksel arıtımında önemli faktörlerdir. Burada, etkinliklerini değerlendirmek için çeşitli sentetik silika malzemeleri özetleniyor ve tartışılıyor.

Sentetik Silika

Silikon dioksit ( SiO ₂ ) olarak bilinen silika , doğada kuvars olarak ve çeşitli canlı organizmalarda yaygın olarak bulunur. Silika en karmaşık ve bol miktarda bulunan malzemelerden biridir ve çeşitli minerallerde veya sentetik ürünlerde bileşik olarak bulunur . Daha önce tartışıldığı gibi, doğal ve sentetik silika bazlı ürünler PRM’nin kontrolü için biyosidal bir seçenektir. Tipik olarak sentetik silika, amorf veya kristal fazda hazırlanabilir. Kristal silika yapısal olarak iyi tanımlanırken, amorf silika uzun menzilli düzenden yoksundur ve düz bir enerji manzarası nedeniyle yapıları güçlü bir şekilde kinetik ve çevresel faktörlere bağlıdır. Silikon dioksit, kütiküllerinden lipitleri emdikten sonra PRM’nin hücre zarının dehidrasyonuna neden olan su/yağ adsorpsiyon özelliklerine sahiptir. Silika ürünlerinin avantajlarından biri de düşük oral toksisitesidir.

Kilpinen ve ark. 2 saf sentetik amorf silika ürünü test edilmiştir: Rentokil (Glostrup, Danimarka) ve test edilmekte olan gizli bir formülasyon (ID). Daha verimli ürün, %75 bağıl nemde 0,6 gün ve %85 bağıl nemde 1,7 gün sonra %50 akar ölümüne neden olan ID idi. Bu sonuçlar ID’nin etkinliğini gösterirken, gözlem aralıkları LT50’yi kesin olarak belirlemek için çok uzundu. Bununla birlikte sentetik silikon dioksit, bu ürünlerin hidrofobikliği nedeniyle daha düşük neme daha az bağımlıdır ve %75 RH’den %85 RH’ye artışa karşı hassastır.

Maurer ve ark. bir sentetik amorf silikayı yetişkin dişi akarlar üzerinde, bunları 0,05 veya 0,005 g (9 veya 0,9 mg/ ^cm2 ) toz veya 0,05 g kuru silika içeren sıvı bir formülasyonla plastik şişelere aktararak test etti. Akarlar karanlıkta 27°C’de tutuldu ve hayatta kalan akarlar, deneyler sırasında binoküler mikroskop altında 4, 24 ve 168 saat sonra sayıldı. Dişi akarlar, silika tozu uygulamasından sonra yumurta üretmediler; bu, sentetik amorf silika tozunun etkisiz olduğunu gösteriyor. Sentetik amorf silika, depolanan üründeki zararlılara karşı kurutma maddesi olarak yaygın şekilde kullanılır. Sentetik amorf silikanın sıvı formülasyonları, PRM dişilerinin üremesini tamamen bastırdı ve in vitro deneyde daha uzun bir kalıcı etkiye sahip oldu. İstila edilmiş yumurtacı kümeslerinde yapılan saha deneyleri, sıvı amorf silikanın daha uzun süreli kalıcı etkisini ortaya çıkardı. Çiftliklerde ve in vitro çalışmalarda elde edilen farklı sonuçlar araştırıldı. Bunlar, silikanın PRM’ye karşı iyi fiziksel etkilerinin, yüksek kaliteli hammadde seçimi ve formülasyon yoluyla artırılabileceğini gösterdi. Ancak silikanın fizikokimyasal özellikleri test edilmemiştir, bu da yüksek kalitenin etkilerini ayırt edebilmektedir. Başka bir deyişle, sentetik amorf silika, test edilen malzemelerin karakterizasyonunu etkileyebilecek temel özellikleri anlaşılmadan test edilmiştir.

Ulrichs ve ark. 12 silika bazlı sentetik amorf silika formülasyonunu test etti. Ancak her numunenin ayrıntılı içeriğini tartışmadılar. Uygulama kolaylığı açısından bazı silika sıvısı ve toz formülasyonları test edildi, ancak etki modu formülasyonun kuruma özelliklerine eşitti. Diğer çalışmalardan farklı olarak test edilen materyalleri öncelikle kendileri değerlendirdiler. Silikanın reaktivitesini araştırmak için yüzey alanı ve boyutu, şekli ve toplanma durumu da dahil olmak üzere morfolojisi önceden karakterize edildi. Taramalı elektron mikroskobu , malzemeler arasındaki farklılıkları ortaya çıkardı ve silika ile akarlar arasındaki etkileşimi etkileyebilecek önemli özellikler araştırıldı. _Si02 içeriğini, spesifik yüzey alanını (BET yüzeyi), katyon değişim kapasitesini ( CEC ) ve su emme kapasitesini ( WAC ) analiz etmek için X-ışını floresansı kullanıldı . CEC’yi ölçmek için fotometrik Cu-trien yöntemi kullanıldı. WAC testi, her numuneden 1 g’ın alüminyum kaplarda (4 cm Ø) kurutulmasıyla gerçekleştirildi. Emme kapasitesi, 105°C’de fırında kurutulan numunelerin ağırlığı ile karşılaştırıldığında %50 bağıl nemde 48 saat sonra ağırlık değişimi yüzdesi (%ağırlık) ile ölçüldü. Laboratuvar ve saha testleri için PRM, tüneklerin altına bantlanmış karton tuzaklar (5 x 5 cm) kullanılarak geleneksel bir arka bahçe tavuk kümesinden toplandı. Gece yarısı akarlar laboratuvara nakledildi ve farklı silika örnekleriyle işleme tabi tutuldu. Akarisit etkinliği her ürün için 3 kopyanın ölüm oranlarından hesaplanan LT50 değerleri karşılaştırılarak belirlendi . Ovisid aktiviteyi belirlemek için laboratuvar türünden akar yumurtaları doğrudan silika ile muamele edildi. Ayrıntılı olarak, 3 petri kabına her biri yaklaşık 25 beslenen yetişkin akar yüklendi ve 48 saat boyunca 25°C ve %70 bağıl nemdeki bir iklim odasında tutuldu. Silika etkinliğinin laboratuvar ve tarla akarı türlerine karşı karşılaştırmasının sonuçları Şekil 5’te gösterilmektedir . Test edilen tüm silika ürünleri için akarisit etkinliği gözlemlendi; etki hızı (LT50) değerlerinde önemli farklılıklar vardı. Her iki deneyde de _LT50 değerlerinin aralıkları tüm sıvı ve toz tipi ürünler için örtüşüyordu. Ancak toz ürünlerin yumurta öldürücü aktivitesinde önemli farklılıklar vardı ve kuluçka oranı %60’ın üzerindeydi ( Şekil 6).). Sıvı ürünler önemli ölçüde ovisidal aktivite gösterdi. Örneğin, sentetik silika ile muamele edilmiş sıvı formülasyonu en düşük kuluçka oranına (%21) neden olurken, en yüksek kuluçka oranı (%95) sentetik toz muamelesinde olmuştur. Elektron mikroskobu analizine göre, toz ve sıvı ürünler laboratuvar akarı türüne karşı açık bir akarisit aktivite ile sonuçlanmıştır, ancak etkileri numuneler arasında farklılık göstermiştir.

Silikaların etkinliği ile morfolojisi veya boyutu arasındaki ilişkiye ilişkin diğer çalışmalar esas olarak böceklerle yürütülmüştür. Pek çok çalışma silika bazlı ürünlerin akarisit etkinliğini araştırmıştır, ancak bunların kan emen akarlara karşı etkinliğini belirleyen parametrelere ilişkin bilgi nadirdir. Genel olarak amorf silikanın toksisitesi, onun içsel toksisitesine, yüzey kimyasına (hücreyle temas eden) ve morfolojisine (boyut, şekil ve toplanma durumu) bağlıdır. Ulrichs ve ark. silikanın sıvı ve kuru formülasyonlarının PRM’ye karşı etkinliğini test etti ve bunların biyofiziksel özelliklerini inceledi.

Laboratuvar analizleri ve elektron mikroskobu, test edilen ürünler arasında SiO ₂ içeriği, BET, WAC 50, CEC ve LT ₅₀ değerleri gibi parametreler açısından birçok farklılık olduğunu gösterdi . SiO ₂ içeriğinin hareket hızı üzerindeki etkisinin aksine , BET, CEC ve WAC 50. Gerçek sonuçlar model tahminleriyle önemli ölçüde ilişkiliydi. BET ve WAC, ürünün etkinliğine katkılarından kısmen sorumlu olan lipit emme kapasitesini yansıtacak şekilde pozitif korelasyon gösterdi. Önceki çalışmalarda, böceklerin yüzey-hacim oranındaki, su emme kabiliyetindeki ve kütiküler bileşiklerdeki farklılıkların silika etkinliğini etkileyip etkilemediğini araştırmak için silika farklı böcek türleri üzerinde test edildi. Ayrıca formülasyon türleri (toz ve sıvı) karşılaştırıldı. Silika ürünlerinin sıvı formülasyonlarının uygulanması kolay olsa da, bunların PRM’ye karşı etkisiz olduğu bulunmuştur (Organik kongre toplantısından Maurer ve ark.). Tüm silika uygulamaları PRM’ye karşı güçlü bir akarisit etki gösterdi. Ancak akarisit etkinliği ürünler arasında önemli ölçüde farklılık gösterdi. Sıvı silika, temas halinde akarları anında öldürdü. Akarlar muhtemelen yüzeylere uygulanan sıvı damlacıklarında boğuluyordu ve bu matris kullanılarak ek bir akarisit etkisi mümkün olabilirdi. Sentetik silikanın sıvı formülasyonu, test edilen sıvı numuneleri arasında en etkili olanıydı. Silikaya başka akarisitler veya katkı maddeleri eklendiğinde, pratikte iyi bilinen akarisit etkisi geliştirilebilir. Bununla birlikte, sıvılar ve kuru tozlar arasındaki benzer LT50 değerleri muhtemelen yerinde meydana gelen olayları yanlış temsil ediyor; kuru tozlar akarların saklandığı çok daha küçük çatlaklara ve yarıklara ulaşabilir. Bu nedenle, yerindeki gerçek LT50 değeri, sıvılar için kuru silika ürünlerine göre çok daha düşük olacaktır. Deney sırasında standartlaştırılmış iklim koşullarının kullanılmasının yanı sıra, ürünler deney öncesindeki sıcaklık ve neme de uyarlandı. Silikanın çevredeki neme önceden uyarlanması, silikanın etkinlik oranlarının ve hataların doğru şekilde karşılaştırılması için çok önemlidir. Yüksek bağıl nem bu maddelerin hızla etkinliğini kaybetmesine neden olur.

Kan unu koşulları da saha ve laboratuvar testleri arasında farklılık gösterir. Akarlardaki yem içeriği silikanın etkinliğinde önemli bir rol oynayabilir çünkü etki şekli kurumadır ve birçok organizma gıdadaki suyu yeniden metabolize edebilir. Farklı yazarlar böceklerin metabolik olarak yemden su alabildiğini gözlemlemiştir ve PRM’nin suyunun neredeyse %90’ını kandan elde ettiğine inanılmaktadır.

Çeşitli raporlarda böcek ilacı etkinliği ile silika parçacıklarının morfolojik parametreleri arasındaki ilişki tartışılmıştır. Yüksek BET yüzey değerlerinin, böceklerin epikütiküllerindeki lipitleri daha hızlı absorbe etme kabiliyetiyle sonuçlandığı tahmin edilmiştir. Pratik olarak sonuçlar, daha yüksek spesifik yüzeylerin kan emen akarların ölüm oranını arttırdığını gösterdi. Bununla birlikte WAC 50, silikanın suya doygunluğu nedeniyle olumsuz bir etkiye sahipti ve bu da kütikülden lipitleri emme kapasitesini azalttı.

Yukarıdaki bulgular silikanın akarisit etkisinin etki şeklinin fiziksel olduğunu göstermiştir. Etki hızının belirlenmesinin yanı sıra malzemenin akarlara karşı ne kadar süreyle aktif olduğunun belirlenmesi de önemlidir. Bu amaçla tüm materyallerin akar popülasyonu üzerindeki ovisidal etkisi araştırıldı. Yumurta ölümü açısından en düşük WAC ve BET değerlerine sahip silika, en yüksek WAC ve BET değerlerine sahip silikalardan daha fazla yumurtayı öldürmüştür. Ek olarak, çevrenin neden olduğu ürünlerin suya doygunluğu, lipitleri absorbe etme kapasitelerini azaltmıştır. Ovisid etkisi çok yüksek olmasa da yumurtadan yeni çıkan larvalar silika uygulamasından birkaç saat sonra öldü. Bu nedenle larvaların silika uygulamasına yumurtalara göre daha duyarlı olduğu görülmektedir. Silikanın sıvı formülasyonlarının etkinliğindeki farklılıkların belirlenmesi zordu. Örneğin, en yüksek WAC, en yüksek yumurta ölüm oranıyla sonuçlanırken, orta WAC değeri, yumurtalara karşı en düşük performansı gösterdi. Bu nedenle WAC değeri silika etkinliği ile ilişkili değildi. BET değeri yumurta öldürücü etkiyle ilişkili değildi ve 2 ürünün spesifik yüzey alanı yumurtalarınkine benzerdi. Önceki bir raporda, daha küçük parçacıkların insanların ve hayvanların akciğerlerine daha derinden nüfuz ederek yeni sorunlara yol açabileceği tartışılmıştı. Ayrıca, üretimin ölçeğinin büyütülmesindeki zorluklar nedeniyle daha küçük boyutlu parçacıkların uygulanması genellikle daha zordur. Bu sonuçlara dayanarak, ürün etkinlik oranlarındaki büyük farklılıklar nedeniyle malzeme dikkatle seçilmelidir. Ayrıca, hangi ürünün kullanılacağını seçerken, uygulama zorluğu ve ürünlerin akarlarla temas etmesini sağlamak için malzemenin akar saklanma yerlerine uygulanabilmesinin sağlanması da dahil olmak üzere, hem sıvıların hem de tozların avantaj ve dezavantajlarının dikkate alınması gerekir.

Sentetik İnorganik Maddeler için Gelecek Perspektifi

Akar Epikutikülün Uzaklaştırılmasına Yönelik Sorpsiyon ve Aşınma Mekanizması

Bu bölümün amacı epikutiküler lipidi bir su bariyeri olarak tartışmak, bunun inorganik materyaller aracılığıyla uzaklaştırılmasının fiziksel kimyasını açıklamak ve akar kontrolünde bu mekanizmanın mevcut kullanımlarını ve görünümünü tartışmaktır. Haşere kontrolü için inert toz, haşere kütiküllerine aşınma, emilim ve subkutiküler bileşiklerin salınması yoluyla zarar verebilir. İnhibitör materyallerin uzaklaştırılması veya hafifletilmesi için su ve diğer besinlerin artan kullanılabilirliğinin kombinasyonu, yapışkan özelliklerin değişmesine ve epikutiküler lipit katmanlarının fiziksel olarak bozulmasına yol açarak kuruma nedeniyle aşırı su kaybına neden olabilir.

Akar kutikulasında ince bir lipoprotein kütikülin, kitin protein prokütikülünü kaplar . Kütikülinin yüzeyi, başlangıçta hidrofobik olan ancak daha sonra en azından kısmen “polifenollerin” oksidasyonundan kaynaklanan kinonlar tarafından tabaklandığında hidrofilik hale gelen epikütikül olarak bilinir. Epikütikül genellikle katı bir mumdur ve lipitler hidrokarbonlar, mum asitleri, esterler, alkoller, dioller, aldehitler, fosfolipitler ve diğer küçük bileşenlerden oluşur. Kütikülin üzerinde duran ince bir lipit tabakası, epikütikülün ana su bariyerini sağlar ve bu, yüzeydeki fiziksel stresin etkisinden dolayı adsorpsiyonla kolayca giderilebilir. Genellikle lipit replasmanı, aşırı kurumayı önlemek için su kaybıyla kolaylaştırılır ve kütikülin üzerindeki ana su bariyerinin kaldırılmasından sonra balmumu moleküllerinin hızlı bir şekilde değiştirilmesiyle kolaylaştırılır. Ester bağlantılarının hidrolizini takiben asitlerin ve esterlerin sabunlaşması nedeniyle sulu çözeltilerin böcek mumu yoluyla nüfuzu artan pH ile artar.

İnorganik ince tozlar, epikutiküler balmumunu kuruma meydana gelecek ölçüde ortadan kaldırarak çoğu böcekte aşınmaya neden olur ve bazı araştırmacılar, tozların böcek öldürücü etkinliğinin, parçacıkların sertliğinin ve aşındırıcılığının arttırılmasıyla artırıldığını bulmuşlardır. Böcek türlerine bağlı olarak, bazı adsorban tozlar zararlıları hızla öldürse de adsorban toz, aşındırıcı toz kadar etkili değildi. Bununla birlikte, alümina ve kolloidal silika gibi adsorbanlar oldukça etkilidir. Kitchener ve ark. epikutid yağ filminin tercihen katı bir parçacığın yüzeyine çekilebileceğini ve tanımlanmış bir kristal yapı olmadan kütikül yüzeyine yapışıp kendisini yönlendirebileceğini öne sürdü. Yağ filmi yüzey göçüyle parçacık üzerine yayılır ve çoğu böcek türünün epikütikülünde oluşan sert balmumu emilebilir; bu emilim tamamen parçacığın fiziksel özelliklerine bağlıdır. Bu nedenle inorganik maddelerin insektisidal etkilerinde 2 farklı mekanizma çalışmaktadır. İlk olarak, silika aerojeller, aktif kömür, ticari ağartma toprakları ve asitle aktifleştirilen kil gibi emici toz veya sıvı formülasyonlar, epikütiküler lipidi bozarak akarın dehidrasyonuna yol açarak sorpsiyon mekanizmasının üstünlüğüne dayanarak epikütiküler mumu uzaklaştırır. Yukarıda ayrıntılı olarak tartışıldığı gibi membran. Ek olarak, insektisidal etkinlik, balmumu moleküllerinin kabul edildiği geniş gözeneklere sahip spesifik yüzeylerle yakından ilişkilidir. İkincisi, emici olmayan tozların böcek öldürücü etkinliği büyük ölçüde aşındırıcılıklarına bağlıdır. Bu nedenle, inorganik malzemelerin etki şekli onların fiziksel özelliklerinden türetilir; bu da en etkili malzemelerin Şekil 7’de açıklandığı gibi aşınma, adsorpsiyon ve dehidrasyon mekanizmalarını kullandığını gösterir.

Alternatif İnorganik Malzeme Adayları ve Sinerjik Stratejiler

Yukarıda tartışıldığı gibi, inorganik materyallerin kırmızı akarın vücuduna yapışmasının, kütiküler mumların aşınmasına veya emilmesine neden olarak zarı bozduğu sonucuna varılabilir. Sentetik malzemeler, yüksek su adsorpsiyon yetenekleri ve yüzey aşınmasına neden olma gibi önemli özelliklere sahip olan alternatif akarisit adaylarıdır. Bu bölümde, gıda katkı maddesi olarak kullanılan bazı sentetik mineral maddeler (sentetik silika dışında), akarisit etkileri nedeniyle PRM kontrolüne aday olarak önerilmektedir. Gelişmiş gözenek yapılarına ve geniş spesifik yüzey alanlarına sahip gözenekli malzemeler, yüksek adsorpsiyon elde etmek için hayati öneme sahiptir.

Fosfat Bazlı Mineraller

Trikalsiyum fosfat gibi fosfat bazlı mineraller, işlenmiş gıdalarda ve unlarda tamamlayıcı mineral katkı maddeleri olarak kullanılır ve çeşitli çalışmalar, bunların depolanan üründeki böceklere ve akarlara karşı toksik etkilerini göstermiştir. Akar gövdesine yapışan parçacıklar, akarlar için toksik olan ince bir tabaka oluşturdu ve trikalsiyum fosfat ile etkileşime girdikten sonra gerilmiş vücut ve bacaklarla ölü akarlar gözlemlendi. Bu etki şekli, diğer inorganik malzemelere benzer şekilde akarın yüzeyinde fiziksel bir etkidir. Ancak akarisit etkisi yaratmak için gereken yüksek dozlar, inhalasyon toksisitesi testlerinin detaylı olarak araştırılmaması nedeniyle olası insan sağlığı sorunları nedeniyle uygulanmasını engellemektedir. Bununla birlikte trikalsiyum fosfat, kendiliğinden sertleşen osteotransdüktif kemik çimentoları ve biyolojik olarak parçalanabilen kemik onarımı gibi biyomedikal uygulamalarda yaygın olarak kullanılan biyouyumlu ve çevre dostu bir malzemedir ve kimyasal sentezi kolay ve ucuzdur.

Silikat Bazlı Mineraller

Kalsiyum silikat hidratlar ( C–S–H ) gibi silikat bazlı mineral malzemeler , malzemelerin insan yapımı sentezi nedeniyle iyi adaylardır; bu, morfoloji ve boyut dağılımının kontrol edilebileceği anlamına gelir. Silikat zincirini işgal eden su molekülleri, silikat yüzeyinin hidrofilikliği ve hidrofobikliğinden etkilenir. Önceki bir çalışma, C–S–H numunelerindeki su dağılımını ölçmüş ve dış ve iç yüzeylerde emilen suyun göreceli oranlarını belirlemiştir. Su buharı izotermlerine göre C–S–H, hidrofilik yüzeyleri nedeniyle su moleküllerinin çok katmanlı adsorpsiyonunu sergileyen dış yüzeylere sahipti ve ara katman suyu da geri dönüşü olmayan şişme/büzülme davranışı sergiledi. Su dağılımının bu ölçümünden, su moleküllerinin C-S-H üzerindeki adsorpsiyon özelliklerinin C-S-H yapısından etkilenebileceği belirlendi. Genel olarak kalsiyum-silikon ( C/S ) oranı aralığı 0,67 ila 1,67 idi ve bu, C-S-H’nin adsorpsiyon özellikleri üzerinde büyük etkiye sahipti. C/S oranı >1 olduğunda, C/S oranının artmasıyla birlikte adsorplanan maksimum su molekülü sayısı da arttı, bu da suyun adsorpsiyon özelliğinin sentez yöntemiyle kontrol edilebileceğini gösterdi. Ek olarak, C-S-H’nin amorf fazı ve kaba düzensiz morfolojik şekli, insanlarda ve tavuklarda toksisiteye neden olmadan aşınmaya neden olur. Ayrıca, öğütme sonrası proses parçacık boyutunun azaltılmasına yardımcı oldu ve kırmızı akarlar üzerindeki aşındırıcı etkiyi arttırmak için daha pürüzlü ve keskin morfolojik yüzeyler üretti. Ek olarak, kalsiyum silikat, ilaç yüklemesi için iyi bir dağıtım aracı olduğundan, bitkiden türetilmiş bileşikler veya hormonlar, kırmızı akar kontrolü için sinerjik akarisit etkiler sağlamak üzere gözeneklerine potansiyel olarak yüklenebilir.

Karbonat Bazlı Mineral

Mezogözenekli magnezyum karbonat ( MMC ) gibi karbonat bazlı mineral malzemeler , suya karşı yüksek afiniteleri ve geniş yüzey alanları nedeniyle etkili nem emicilerdir. Magnezyum karbonat, gıda işleme uygulamalarında bir gıda katkı maddesi olarak ve aynı zamanda diyet takviyelerinde bir magnezyum kaynağı olarak yaygın şekilde kullanılmaktadır. Mezogözenekli magnezyum karbonat, silika kadar su almış olsa bile yağı da alabilir. Örneğin, ağırlıkça %50 yağ ile önceden yüklenmiş silikanın su adsorpsiyon kapasitesi %50’den fazla azaldı, ancak MMC, ağırlıkça %50 yağ ile yüklendiğinde nem emme kapasitesinin yaklaşık %80’ini korudu. Su molekülleri adsorbe edildiğinde, artan hareketlilikleri sayesinde hem MMC yüzeyiyle hem de yığın yapısıyla kolayca etkileşime girer ve böylece ikili bir emme etkisi yaratır. Daha önce tartışıldığı gibi, bitki ekstraktlarının DE ile birleştirilmesi kırmızı akarları etkili bir şekilde kontrol altına aldı; Adsorbe edilmiş uçucu yağ içeren MMC, itici yağların salınması ve akarların yüzey zarı üzerinde fiziksel etkiler yoluyla akarlara karşı sinerjistik bir etki yaratacaktır. Son zamanlarda MMC, in vitro sitotoksisite, cilt tahrişi ve in vivo akut sistemik toksisite testleri yoluyla toksikolojik bir değerlendirmeye tabi tutulmuştur . Bu testler, malzemenin insan dermal fibroblast hücreleri için toksik olmadığını ve gram pozitif bakteri Staphylococcus epidermidis’e karşı antibakteriyel etkiye sahip olduğunu gösterdi. Yuvarlak, hafif düzensiz ve iğne benzeri bir şekle ve pürüzlü yüzey yapısına sahip geniş bir parçacık boyutu aralığına sahiptir; bu, farklı morfolojik şekil ve çapların reaksiyon sıcaklığı, başlangıç ​​konsantrasyonu, karıştırma hızı gibi sentez koşulları tarafından kontrol edilebileceğini gösterir. titrasyon hızı ve dengeleme süresi. İğne benzeri şekil, akarın aşınmasına neden olabilir ve biyouyumluluk ve antibakteriyel aktivitenin yanı sıra etkili bir fiziksel kontrol mekanizması sağlayabilir.

Diğer İnorganik Malzemeler

Ag, Ba, Cd, Co, Cu, F, I, Li, Mn, Mo ve Zn içeren diğer mineral maddeler akar doğurganlığını ve yumurta canlılığını etkiler. Ancak akarisitler gibi malzemelerin pratikte uygulanması ekonomik veya çevresel kaygılardan dolayı pek mümkün değildir.

Sonuçlar

Kümes hayvanları kırmızı akar istilaları dünya çapında yumurta tavuklarında ciddi bir sorundur ve akarisit direnci ve hedef olmayan organizmalara ve çevreye yönelik pestisit toksisitesinin yanı sıra artan istilalar, diğer evcil kümes hayvanları, evcil hayvanlar ve diğer hayvanlar (insanlar dahil) için bile sorun teşkil etmektedir. PRM kontrolüne ve yok edilmesiyle ilgili araştırmalara artan ilgi, bunun biyolojisi ve ekolojisine ilişkin anlayışımızı geliştirerek çeşitli alternatif kontrol yöntemlerinin önerilmesine yol açtı. Mikrobiyolojideki ilerlemeler etkili aşıların geliştirilmesini kolaylaştırmış ve doğal ürünlere olan talep, geleneksel pestisit alternatifleri olarak bitki kaynaklı bileşiklerin, doğal düşmanların, büyüme düzenleyicilerin ve biyopestisitlerin geliştirilmesine yol açmıştır . Her ne kadar bu tür stratejiler kimyasal kaynaklı toksisiteyi azaltmayı amaçlasa da, bu yaklaşımların birçoğunun güvenli kullanım ve uygulama için tescil edilmeden önce hala hükümet yetkilileri tarafından test edilmesi ve onaylanması gerekiyor ve hatta üretim maliyetlerini azaltmak için ölçeğin büyütülmesi gerekebilir.

DE, silika bazlı ürünler, kaolin kili ve talk gibi inorganik malzemelerin kullanımı, PRM tedavisi için onaylanmış alternatif stratejiler olarak birkaç yıldır dikkat çekmektedir. Bazı bölgelerde organik çiftliklerde yalnızca doğal silika kullanılabiliyor. Silikanın amorf formunun çevreye, hayvanlara ve insan sağlığına zararlı olduğu düşünülmektedir. Silika bazlı inorganik malzemeler zehirli değildir ve PRM dış iskeletinin epikütikülünü silikon dioksitin emici özellikleri yoluyla kurutarak akarların kurumasına neden olur. Bu silika bazlı ürünlerin birçoğu ticari olarak mevcuttur ve Avrupa’da yaygın olarak kullanılmaktadır. PRM’ye karşı etkililik, parçacıkların emme kapasitesi, kimyasal bileşim, parçacık boyutu ve spesifik yüzeylerdeki farklılıklar nedeniyle farklı silika bazlı ürünler arasında değişiklik gösterir. Bu fiziksel özellikler, akar kontrolünü sağlamak için benzer veya daha iyi özelliklere sahip yeni malzemelerin geliştirilmesini teşvik etmiştir. Özellikle, bir malzemedeki gözenekli yapılardan elde edilen su adsorpsiyon özelliklerinin arttırılması, kırmızı akarların fiziksel olarak kontrol edilmesi için inorganik malzemelerde başarılı ilerlemelere yol açabilir. Ayrıca bu materyaller, diğer zararlı böcek yönetimi de dahil olmak üzere pek çok alanda herhangi bir onay gerektirmeden pratik uygulamalara sahip olabilir.

Keyifli okumalar dileriz.

Kaynaklar

1. Chauve, 1998
2. Koenraadt ve Dicke, 2010b
3. George ve ark., 2014
4. Kilpinen, 2001
5. Beugnet ve ark., 1997
6. Chirico ve ark., 2003
7. Nordenfors ve ark., 1999
8. Bruneau ve ark., 2003
9. Kilpinen ve ark., 2005
10. Sigognault Flochlay ve ark., 2017
11. Wójcik ve ark., 2000
12. Sparagano ve ark. 2009
13. Kilpinen, 2005
14. Axtell, 1999
15. Aulakh ve ark., 2006
16. Arkle ve ark., 2008
17. Sparagano ve ark., 2014
18. George ve ark., 2015
19. Abbas ve ark., 2014
20. Huyghe ve ark., 2017
21. Ansari ve ark., 2014
22. Kaczala ve Blum, 2016
23. Yuan ve ark., 2016
24. Marangi ve ark., 2009
25. Coles ve Dryden, 2014
26. Isman, 2006
27. Veeresham, 2012; Soulié ve ark., 2021
28. George ve ark., 2009b
29. Ben-Issa ve ark., 2017a, b
30. Lushchak ve ark., 2018
31. Deletre ve ark., 2016
32. Lushchak ve ark., 2018
33. Lima-Barbero ve ark., 2019
34. Fuente ve ark., 2007
35. Bartley ve ark., 2012
36. Makert ve ark., 2016
37. Soulié ve ark., 2021
38. Sigognault Flochlay ve ark., 2017
39. De Luna et al, 2008
40. Valiente Moro ve ark., 2009
41. Moro ve ark., 2010
42. Sommer ve ark., 2016
43. Valiente Moro ve ark., 2007
44. Majowicz ve ark., 2010
45. Cafiero ve ark., 2019
46. Pezzi ve ark., 2017
47. Sioutas ve ark., 2021
48. Anderson ve Meade, 2014
49. Cafiero ve ark., 2011
50. Marangi ve ark., 2012
51. Decru ve ark., 2020
52. Arends ve Robertson, 1986
53. Axtell ve Arends, 1990
54. Harrington vd., 2011
55. Mul vd., 2015
56. Tomley ve Sparagano, 2018
57. Decru ve ark., 2020
58. Damalas ve Eleftherohorinos, 2011
59. Meyer-Kühling ve ark., 2007
60. Gassel ve ark., 2014
61. Brauneis ve ark., 2017
62. Thomas ve ark., 2017
63. Thomas ve ark., 2017
64. Maurer ve ark., 2009b
65. Holt ve ark., 2011
66. Lundh ve ark., 2005
67. Chorianopoulos ve ark., 2004
68. Kirimer vd., 1995
69. Tabari vd., 2015
70. Barimani vd., 2016
71. Nechita vd., 2015
72. Pritchard vd., 2016
73. Deletre ve ark., 2016
74. Deletre ve ark., 2016
75. Santana ve ark., 2018
76. Lee ve ark., 2019
77. Camarda ve ark., 2018
78. Tatami ve ark., 2001
79. Sasaki ve ark., 2005
80. Mkolo ve Magano, 2007
81. Nechita ve ark., 2015
82. Ranjbar-bahadori ve ark., 2014
83. Zriki ve ark., 2020
84. Mul ve ark., 2015
85. Lesna ve ark., 2009
86. Roy ve ark., 2017
87. Wales ve ark., 2010
88. Chauve, 1998
89. Axtell, 1999
90. Lesna ve ark., 2012
91. Tomer ve ark., 2018
92. Tavassoli ve ark., 2011
93. Immediato ve ark., 2015
94. Harrington ve ark., 2011
95. Pritchard ve ark., 2015
96. Harrington ve ark., 2011
97. Entrekin ve Oliver, 1982
98. Coba de la Peña ve ark., 2017
99. Xiao ve ark., 2021
100. De Luna ve ark., 2009
101. George vd., 2009b
102. Birkett vd., 2011
103. Gay vd., 2020
104. Kim ve ark., 2007
105. George ve ark., 2008a, 2009b
106. Kim ve ark., 2004
107. López ve Pascual-Villalobos, 2010
108. Na ve ark., 2011
109. Lee ve ark., 2019
110. George ve ark., 2010
111. Soulié ve ark., 2021
112. Thompson ve ark., 2003
113. George ve ark., 2009a
114. Ben Jemâa ve ark., 2012
115. Dardouri ve ark., 2019
116. Rajabpour vd., 2018
117. Kim ve ark., 2018
118. Roy ve ark., 2014
119. Rajabpour ve ark., 2019
120. Abdel-Ghaffar ve ark., 2008, 2009
121. Locher ve ark., 2010
122. George ve ark., 2008b
123. Isman, 2006
124. George ve ark., 2009a;
125. Mul ve ark., 2009
126. Vivaldo ve ark., 2017
127. Sonenshine, 1985
128. Carr ve Roe, 2016
129. Entrekin ve Oliver, 1982
130. Steidle ve ark., 2014
131. Entrekin ve Oliver, 1982
132. Koenraadt ve Dicke, 2010a
133. Kuwahara vd., 1994
134. Kuwahara, 2004, 2010
135. Maruno ve ark., 2012
136. Kuwahara, 2010
137. Skelton ve ark., 2010
138. Sonenshine, 1985
139. Regev ve Cone, 1975, 1976, 1980
140. Mori ve Kuwahara, 2000
141. Mizoguchi ve ark., 2005
142. Kuwahara vd., 1992
143. Sato vd., 1993
144. Ryono vd., 2001
145. Tatami vd., 2001
146. Maia ve Moore, 2011
147. Brenner ve Kramer, 2019
148. Chauve, 1998
149. Willadsen, 2004
150. McDevitt ve ark., 2006
151. Harrington ve ark., 2009b
152. Arkle vd., 2008
153. Sparagano vd., 2014
154. Schicht ve ark., 2013
155. Burgess Stewart ve ark., 2018
156. Wright ve ark., 2009
157. Bartley ve ark., 2015
158. Bartley ve ark., 2017
159. Harrington ve ark., 2009a
160. Bartley ve ark., 2012
161. Bartley ve ark., 2009
162. Merget vd., 2002
163. Schulz vd., 2014
164. Kilpinen ve Steenberg, 2009b
165. Schulz ve ark., 2014
166. Maurer ve ark., 2009b
167. Takeuchi ve ark., 2005
168. Maurer ve ark., 2009b
169. Alves ve ark., 2020
170. Yazdimamaghani vd., 2018
171. Kilpinen ve Steenberg, 2009a
172. Ebeling, 1971
173. Athanassiou ve ark., 2005
174. Fields ve Korunic, 2000
175. Kilpinen ve Steenberg, 2009a
176. Maurer ve ark., 2009a
177. Alves ve ark., 2020
178. Mul ve ark., 2017
179. Liu ve diğerleri, 2016 
180. Mohsen ve El- maghraby, 2010
181. Subramanyam ve Roesli, 2000
182. Mullens ve diğerleri, 2012
183. Martin, 2007
184. Trofymluk ve diğerleri, 2005
185. Schulz ve diğerleri, 2014
186. Yoo ve diğerleri, 2022
187. Kilpinen ve Steenberg, 2009a
188. Collins, 2006
189. Meier ve Kahr, 1999
190. Mewis ve Ulrichs, 2001
191. Zhang ve diğerleri, 2012
192. Badii ve diğerleri, 2014
193. Abdel-Ghaffar ve diğerleri, 2008
194. Akbar ve ark., 2004
195. Beugnet ve diğerleri, 1997
196. Faulde ve diğerleri, 2006
197. Mucha-Pelzer ve diğerleri, 2008
198. İslam ve diğerleri, 2010
199. Faulde ve diğerleri, 2006
200. Ulrichs ve diğerleri, 2008
201. Limbach ve diğerleri, 2005
202. Zeni ve diğerleri, 2021
203. Wigglesworth, 1947
204. Chibnall ve diğerleri, 1934
205. Wigglesworth, 1985
206.  Wang ve diğerleri, 2016
207. Gibbs, 2011
208. Aslan ve diğerleri, 2015
209. Ranabhat ve Wang, 2020
210. Khayan ve diğerleri, 2019
211. Ebeling, 1971
212. Parkin, 1944
213. Cotton ve Frankenfeld, 1949
214. Wang ve diğerleri, 2020 
215. Carrodeguas ve De Aza, 2011
216. Carrodeguas ve De Aza, 2011
217. Giovambattista ve diğerleri, 2009
218. Roosz ve diğerleri, 2016
219. Hou ve diğerleri, 2018
220. Pochard ve diğerleri, 2014
221. Bamford, 2021
222. Welch ve diğerleri, 2016
223. Wang ve diğerleri, 2008
224. Boczek ve diğerleri, 1984